Hogy csinálják az RT-PCR tesztet?
Megosztás:A koronavírus kimutatására használt RT PCR kimutatja, hogy van-e a vizsgált mintában koronavírus RNS, és ha igen, mennyi?
Mivel a koronavírus a légutakat szereti fertőzni, a kimutatásához innen érdemes mintát venni: az orrból és a torokból, viszonylag mélyre nyúlva a mintavevő pálcikával. Ami erre rátapadt, azt bemossák egy speciális folyadékba, ami tartósítja a mintát. Ebből vonják ki az RNS-t egy előre gyártott kit segítségével, így megszabadulnak minden más molekulától ami a továbbiakban csak felesleges zavaró tényezőt jelentene.
Ezután történik maga az RT-PCR. Ilyenkor legelőször az RNS-ről készítünk egy DNS másolatot. Erre azért van szükség, mert sokkal hőstabilabb, és a módszer során magas hőmérséklet használunk, hogy a DNS két szálát szétválasszuk (hogy a másoló enzim hozzáférhessen) és hogy a DNS-szaporodást elősegítsük, annak pontosságát javítsuk.
Az RT-PCR úgy működik, hogy a vírus-RNS egy nagyon egyedi, csak a koronavírusra jellemző részéről rengeteg DNS másolatot készítünk egy nagyon specifikus DNS-próbával (primerrel) és egy DNS másoló enzimmel (úgynevezett DNS-polimerázzal). A reakcióhoz fluoreszcens tesztmolekulát is keverünk, amely egy DNS kötő festék, és rögtön megjelöli a frissen készült DNS molekulákat. Így ha a vírus RNS-ét tartalmazta a minta, akkor sok DNS másolat képződik, sok fluoreszcens tesztmolekula köt hozzá, és szép nagy jelet fogunk tapasztalni, azaz világítani fog a minta.
Minél többször szaporítjuk, annál erősebb lesz ez a jel. A mérés során sok ilyen DNS szaporítási ciklus zajlik le egymás után, és mindegyik végén rögzítjük a fluoreszcens jelet. Az RT PCR névben az “RT” a real time rövidítése, vagyis valós időben követjük nyomon a DNS mennyiségének növekedését a szaporítási ciklusok során.
A fluoreszcens festék jele annál gyorsabban fog növekedni, minél több volt a mintában a kiindulási vírus RNS mennyiség. Az RT-PCR teszthez idő kell és megfelelő felszereltség: házilag nem lehet kivitelezni, csak laboratóriumban elvégezhető. Szakértelem szükséges hozzá, és egy készülék (RT-PCR), ami biztosítja, hogy a DNS másolódjon, és közben rögzíti a fluoreszcens jeleket is.
Címkék: teszt, tesztelés, PCR, RT-PCR, RNS
Utolsó módosítás: